Validation d’interactions moléculaires candidates entre le virus de la fièvre aphteuse et la cellule-hôte bovine - Anses - Agence nationale de sécurité sanitaire de l’alimentation, de l’environnement et du travail Accéder directement au contenu
Poster De Conférence Année : 2018

Validation d’interactions moléculaires candidates entre le virus de la fièvre aphteuse et la cellule-hôte bovine

Manon Borde
  • Fonction : Auteur
Eve Laloy
Naomi Ledey
  • Fonction : Auteur
Anthony Relmy
  • Fonction : Auteur
  • PersonId : 1075108
Aurore Romey
Kamila Gorna
  • Fonction : Auteur
Damien Vitour
  • Fonction : Auteur
  • PersonId : 1136800
Stéphan Zientara

Résumé

La fièvre aphteuse (FA) est une maladie animale virale très contagieuse affectant les artiodactyles domestiques et sauvages, principalement les bovins, porcins, ovins et caprins. Le virus responsable est le FMDV (Foot and Mouth Disease Virus), un Aphtovirus de la famille Picornaviridae. Le FMDV présente 7 sérotypes différents, chacun présentant plusieurs sous-types. Suite à l'infection aiguë des bovins par le FMDV, 15 à 50% des ruminants deviennent infectés de façon persistante, indépendamment de leur statut vaccinal. De tels animaux, chez qui le virus vivant peut-être isolé plus de 28 jours après l’infection, au niveau des tissus oropharyngés, sont définis comme «porteurs asymptomatiques» et représentent un risque potentiel de transmission du virus aux animaux sensibles. Les mécanismes d’établissement et de maintien de la persistance ne sont en effet pas clairement élucidés à ce jour mais des travaux menés in vitro comme in vivo indiquent une co-évolution du FMDV et des cellules-hôtes au cours de la persistance. Dans ce contexte, nos travaux de recherche visent à étudier les interactions entre le FMDV et l’hôte et plus particulièrement la réponse immune innée induite par ce virus et sa modulation dans le cadre d’une infection persistante dans des modèles de cellules épithéliales bovines développés au laboratoire. Nous avons précédemment entrepris l’étude de l’ «interactome» du FMDV de type O isolat O/FRA/1/2001 (13 protéines), par la méthode du double hybride en levure en criblant une banque d’ADNc bovine. L’ensemble des cribles a ainsi permis de mettre en évidence 11 interactions candidates entre protéines du FMDV et protéines de l’hôte, impliquant potentiellement 3 voies de signalisation (immunité innée, apoptose et autophagie). En parallèle, les modèles cellulaires d’infection persistante ont permis de collecter des virus aphteux « persistants » et d’identifier des mutations dans ces virus. Notre objectif est à présent de valider biochimiquement les interactions moléculaires candidates issues des cribles en levure. Cette validation sera réalisée notamment par des expériences de chromatographies d’affinité (GST pull down), co-immunoprécipitation, western-blot et/ou de co-localisation par immunofluorescence. Les gènes codant pour les protéines cellulaires candidates sont en cours de clonage dans les vecteurs d’expression adéquats par la technique Gateway. Ce travail sera ensuite étendu en comparant les interactions établies par des protéines de virus FMDV « persistants ». En parallèle, nous allons construire un clone infectieux ADNc du FMDV de type O afin de disposer d’un système de génétique inverse permettant d’étudier l’impact des mutations identifiées au cours de la persistance, sur les interactions virus/cellule bovine. Ce clone infectieux sera construit par assemblage linéaire de produits de PCR chevauchants en utilisant la technique de « USER fusion». Ceci permettra de générer un ADNc complet linéaire sous promoteur T7 permettant sa transcription ultérieure. Le virus aphteux recombinant pourra ensuite être obtenu après transfection de cet ADNc dans des cellules sensibles. Les données de cette étude devraient nous permettre de mieux comprendre la pathogenèse du FMDV par l’identification des voies de signalisation cellulaires modulées au cours de l’infection (aiguë ou persistante) et pourraient donc contribuer au développement de meilleures stratégies de contrôle.
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Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)

Dates et versions

anses-04440768 , version 1 (06-02-2024)

Identifiants

  • HAL Id : anses-04440768 , version 1

Citer

Manon Borde, Eve Laloy, Quentin Richard, Naomi Ledey, Grégory Caignard, et al.. Validation d’interactions moléculaires candidates entre le virus de la fièvre aphteuse et la cellule-hôte bovine. XXèmes Journées Francophones de Virologie, Mar 2018, Paris, France. ⟨anses-04440768⟩
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