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Poster De Conférence Année : 2021

DEVELOPPEMENT D’UNE RT-PCR TRIPLEX EN TEMPS REEL EN UNE ETAPE POUR LA DETECTION DES VIRUS DE LA FIEVRE APHTEUSE

Résumé

La fièvre aphteuse (FA) est une maladie très contagieuse pour les animaux artiodactyles sauvages et domestiques. En cas d’épizootie, cette maladie à déclaration obligatoire a des répercussions socio-économiques majeures pour l'élevage notamment en raison de la mise en place immédiate d’un embargo commercial. La FA se caractérise par l’apparition d’aphtes au niveau du mufle, de la bouche, des lèvres, de la langue, des mamelles, des espaces inter digités et au-dessus des onglons. La maladie est rarement mortelle mais peut provoquer de fortes boiteries chez les animaux, entrainant une perte de mobilité, une baisse de l’appétit et une chute de la production laitière. Le pathogène responsable est un Aphtovirus de la famille Picornaviridae: le virus de la fièvre aphteuse (Foot-and-Mouth Disease Virus – FMDV). Il existe sept sérotypes immunologiquement et génétiquement distincts (A, O, C, Asia1, SAT1, SAT2 et SAT3). Une des missions principales du Laboratoire de Référence pour la FA est de confirmer ou infirmer rapidement toute suspicion clinque par la recherche du virus de la FA et de le différentier d’autres virus causant des maladies vésiculeuses cliniquement semblables tels que le virus de la maladie vésiculeuse du porc, le Seneca Valley Virus ou bien le virus de la stomatite vésiculeuse. Parmi les différentes méthodes utilisées couramment dans le diagnostic viral, la RT-PCR en temps réel est l’une des plus rapides, spécifiques et sensibles. Actuellement, le laboratoire utilise simultanément deux RT-PCR duplex en une étape utilisant la chimie TaqMan®, ciblant la région codant la polymérase virale (3D) et le site d’entrée ribosomique interne (IRES), toutes deux en duplex avec le gène de la β-actine constituant un contrôle endogène (Gorna, K. et al. 2016). La présente étude vise à développer et valider une RT-PCR en temps réel triplex unique et en une étape. Le développement et la validation de cette nouvelle méthode de diagnostic est basée sur la norme française NF-U47-600-2. La méthode cible simultanément dans le même mix réactionnel, les deux gènes les plus conservés inter-souches avec une homologie de 83% et 81% respectivement: la région codant la polymérase virale (3D) et celle codant la protéine non-structurale (2B). A l’aide d’un panel de plus de 40 souches, la spécificité de la méthode a été évaluée à 100% pour la région 3D et à 96% pour la cible 2B. La mise en place d’un essai inter-laboratoires de validation de méthode auquel participeront différents laboratoires européens permettra d’affiner l’évaluation de la robustesse de cette méthode. Le développement de cette nouvelle méthode améliorera le diagnostic de la FA en offrant une sensibilité élevée de détection du génome viral en moins de trois heures pour tous les sérotypes du virus FA aussi bien dans des lambeaux d’épithélium qu’à partir d’échantillons de type écouvillons. Elle permet également de diviser par deux l’ensemble des réactifs et consommables nécessaires par rapport à l’utilisation des deux RT-PCR duplex.
Fichier non déposé

Dates et versions

anses-04526270 , version 1 (29-03-2024)

Identifiants

  • HAL Id : anses-04526270 , version 1

Citer

Cindy Bernelin-Cottet, Anthony Relmy, Anne-Laure Salomez, Aurore Romey, Souheyla Benfrid, et al.. DEVELOPPEMENT D’UNE RT-PCR TRIPLEX EN TEMPS REEL EN UNE ETAPE POUR LA DETECTION DES VIRUS DE LA FIEVRE APHTEUSE. XXIIIemes Journées Francophones de Virologie, Apr 2021, Montpellier ( Virtual Conference ), France. ⟨anses-04526270⟩
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